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鳥苷酸的生產方法有酶水解ＲＮＡ法、菌體自溶法、發酵法和化學合成法４種方法。鳥苷酸生產工藝目前運用最廣泛的是發酵轉化法，利用一定微生物，以葡萄糖作為碳源生產鳥苷，再利用生物或化學方法將其轉化為鳥苷酸，如鳥苷磷酸化得鳥苷酸，且工業化生產鳥苷酸的方法就是采用鳥苷發酵的二步生產法。

菌體自溶法

當微生物遇到對生長不利的條件時，微生物就會利用微生物細胞中本身具有的各種RNA分解酶，啟動核糖體自溶系統，使RNA自溶，以獲得足夠維持生存的能量。菌體自溶法是在一定條件下由細菌自溶降解其自身的核糖核酸，從而獲得核苷酸的方法。因為效率太低，而且提取困難，菌體自溶法目前基本不用。

酶水解RNA法

酶水解RNA法是以酵母或白地霉細胞等為原料，利用磷酸二酯酶水解核糖核酸來制備鳥苷酸的方法,主要包括從菌體中提取RNA、5'-磷酸二酯酶制備、RNA的酶解和單核酸的分離、純化。此方法起源于20世紀60年代初，日本的國中明發現了利用橘青霉（Penicilliumcitrinum）提取的5'-磷酸二酯酶可以降解RNA生成5'-核苷酸。Chemicalbook酶水解RNA法關鍵酶是青霉菌5'-磷酸二酯酶，由于副產品較多，此方法目前也不常用。5'-磷酸二酯酶以桔青酶或金色鏈霉菌為出發菌種，通過液體深層發酵法獲得，其工藝流程如下：斜面菌種培養→種子培養→發酵培養→濾液。

化學合成法

化學合成法通常是用焦磷酸或者磷酸的活性衍生物對核苷進行磷酸→酯化反應的方法。因為需要大量有機溶劑,存在環境污染及原料來源等問題，化學合成法在生產中也極少使用。

發酵法

發酵法生產鳥苷酸可分為2種方法：直接發酵法和發酵轉化法。直接發酵法利用一定數量微生物，以葡萄糖為碳源進行發酵得到鳥苷酸，但此方法得到的鳥苷酸產量低，不能達到工業化要求。目前，運用最廣泛的方法是發酵轉化法，利用一定微生物，以多糖或葡萄糖作為碳源生產鳥苷，再利用生物或化學方法將其轉化為鳥苷酸。一般都是先對枯草芽孢桿菌進行斜面培養、種子培養以及發酵培養獲得鳥苷，再利用溶液與吡啶溶液制得鳥苷酸，反應式如圖所示。

目前，我國鳥苷酸發酵得率較國外先進水平低，鳥苷酸工業化生產還未成熟，如何提高鳥苷酸產量成為研究的重中之重。